目的:转发状分裂相关增强子1(HESR1)基因到人视网膜血管内皮细胞,下调血管内皮生长因子受体KDR的表达,上调紧密连接蛋白occludin的表达,减少血管渗漏等并发症,达到重塑视网膜新生血管的目的。
方法:将HESR1克隆到pcDNA3.1+载体内组成pcDNA3.1+-HESR1重组质粒,原代培养人视网膜血管内皮细胞,实验中加入10ng血管内皮生长因子(VEGF)刺激内皮细胞,模仿体内新生血管内皮细胞激活状态,脂质体转pcDNA3.1+-HESR1重组质粒到培养的细胞内,半定量PCR检测HESR1基因的表达,免疫组化检测KDR和occludin表达的改变,Western blot 分析HESR1对occludin表达的作用, 流式细胞仪检测HESR1对视网膜血管内皮细胞增殖的作用,体外建立视网膜血管2维模型,检测HESR1对血管通透性的影响。
结果:HESR1基因成功转染到血管内皮细胞内,并有表达增高,KDR表达下降,occludin表达增强。流式细胞仪检测HESR1对视网膜血管内皮细胞的增殖有抑制作用,通过体外2维血管模型观察到HESR1能降低血管通透性。
结论:HESR1基因能下调KDR的表达,增强occludin的表达,减少血管渗漏,达到重塑视网膜新生血管的目的,为视网膜新生血管的治疗提供新的思路和方法。
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