角膜缘上皮干细胞体外培养的形态学及功能研究
王丽娅 赵承彦 庆慧玲 杜连心
河南省眼科研究所、河南省角膜病重点实验室(河南省郑州市纬五路7号，郑州 450003）
目的 通过体外组织培养，观察角膜上皮干细胞增殖、分化与成膜过程及其在维持角膜上皮细胞均一性中的作用 。方法 以兔眼角膜—结膜分界线为基准，向内切取宽2mm、深1mm的角膜缘组织条带，分成1mm×2mm小块，移至不同载体上培养。相差显微镜跟踪观察角膜上皮干细胞增殖、分化与成膜情况。结果 1. 角膜上皮干细胞自角膜缘组织中游离出来后，呈现多种形态，最先分泌大量的角蛋白，形成平整、均匀的透明膜片；3-4周后，分化成柱状细胞，停止分泌角蛋白，浮出膜面，密集排列。角膜上皮细胞的增殖周期有限，通常可以传代15-20代。 2.角膜缘组织培养形成的膜都是均质、透明的，膜上除了有同一组织来源的上皮细胞外，没有异质细胞或杂质。膜在形成、增长和扩展过程中如遇到成纤维细胞（同组织来源）或异质细胞(如羊膜上皮细胞)，成膜细胞分泌角蛋白并释放出某种理化成分（未鉴定）使之受损，受损细胞先收缩，继而细胞膜破裂，细胞内出现颗粒和纤维化，最后消失。完成这一过程之后，膜继续扩展，保持膜的平整、光滑、透明。结论 角膜上皮干细胞在成膜过程中可分泌大量的角蛋白，并具有化解异质细胞，保持膜均质、透明状态的生理特性。 |
