液相核酸芯片鉴定角膜常见致病真菌的实验研究
董燕玲 谢立信 银红梅 孙士营 黄海南
山东省眼科研究所青岛市燕儿岛路5号 266071
【摘要】目的 以液相核酸芯片技术原理为基础，建立快速鉴定国内常见角膜致病真菌的实验方法。方法 设计针对5种国内常见角膜致病真菌（茄病镰刀菌、串珠镰刀菌、尖孢镰刀菌、烟曲霉菌和黄曲霉菌）rRNA基因ITS区的种特异性探针，5’端氨基C12修饰后与不同荧光色的微球结合，建立液相核酸芯片检测体系并通过正交设计实验优化反应条件。将目的真菌的5株标准菌株和42株临床分离菌株的基因组DNA以一对真菌通用引物扩增并标记后用于杂交检测，进而评估该检测系统的特异性和灵敏度。结果 在优化后的最佳反应条件下，所建立的液相核酸芯片体系可在PCR后3小时内准确将5株标准菌株和42株临床分离菌株鉴定至种的水平；单一菌种检测和5种菌种平行检测的平均荧光强度无统计学差异（P>0.05）；平均荧光强度的变化与PCR产物的量呈正相关（r=0.74）；检测范围为188ng～0.94ngPCR产物，最低检测浓度比琼脂糖凝胶电泳低40倍；四次重复检测的变异系数在1.8%～13.7%之间。结论 本实验建立、优化的液相核酸芯片检测系统可以在同一反应体系内快速将一至多种目的角膜致病真菌鉴定至种的水平，具有较高的特异性、灵敏度和重复性。
【关键词】液相芯片；角膜；真菌；基因检测
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