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长效细胞示踪剂CM-DiI在干细胞治疗兔眼外肌机械损伤中的应用
作者:闵晓珊  文章来源:湖南省中南大学附属湘雅医院眼科  点击数1997  更新时间:2008/2/15  文章录入:毛进  责任编辑:毛进
目的:使用长效细胞示踪剂CM-DiI标记的同体骨髓干细胞移植于兔眼外肌机械损伤区,追踪并观察供体细胞的转归和组织修复过程。
方法:无菌条件下采集新西兰大白兔的骨髓干细胞,分离培养间充质细胞,用CM-DiI荧光标记P2-3期细胞(2周左右)后注入以经典割裂法建立的兔眼外肌损伤模型的试验区,以此进行细胞治疗。于损伤后第1、4、7、14天局部注入细胞悬液,以正常组织的细胞悬液注射和损伤区空白载体溶液注射为阴性对照。注射后第1、4、14天处死动物,取目标肌肉行冰冻切片,在共聚焦显微镜下观察CM-DiI阳性细胞的转归;行Masson’s三色染色观察和比较肌肉组织损伤后的病理变化过程。
结果:CM-DiI阳性细胞在细胞移植后第1天即可看到与局部肌纤维细胞的融合、贴附,第4和14天都可以观察到损伤区有染色阳性的区域,多个肌细胞胞质出现染色阳性。从组织学检查的角度,干细胞治疗可以明显减少肌束间的胶原含量、减少炎性细胞浸润、减轻疤痕化程度,伤后1周内的干预效果要好于第14天后治疗。
结论:CM-DiI是一种稳定、长效且无毒的细胞示踪剂,可以有效的显示移植细胞在活体组织中的移行、分化和转归,使我们从细胞水平更好的了解骨髓间充质干细胞对减轻受损眼外肌组织的纤维化过程的积极作用,为细胞治疗应用于临床提供更有力的科学依据。
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