重组人色素上皮衍生因子（PEDF）的研制
朱秀萍* 王亚妮 朱娟莉 刘先宁 杨华 梁厚成 安娜
（陕西省眼科研究所 西安市眼科医院 西安 710002）
[摘要]：目的人色素上皮细胞衍生因子是一种有效的新生血管形成抑制因子和神经营养因子。本文构建了人色素上皮衍生因子基因的原核表达载体并表达纯化出重组的PEDF蛋白。方法采用PCR方法扩增PEDF基因，将扩增产物与原核表达载体pET32a连接后，转化大肠杆菌BL21，通过IPTG诱导表达人PEDF蛋白。经SDS-PAGE和Western-blot鉴定后，镍柱亲和层析法变性条件下纯化带6×His-tag的重组融合蛋白，逐步稀释法复性，透析后，得到纯化的重组蛋白。Bradford法测蛋白浓度。结果扩增得到目的基因长度为1270bp,经测序确证成功构建pET32a-PEDF表达载体。通过优化诱导表达条件，重组蛋白在BL21(DE3)宿主菌中获得了稳定高效表达，SDS-PAGE和Western 鉴定表达产物，得到了相对分子质量为66kD的融合蛋白。纯化得到27mg/L的重组融合蛋白。结论成功克隆了人PEDF基因,并得到了重组人PEDF蛋白的高效表达及纯化蛋白，为进一步研究其功能及推广其应用奠定了基础。
关键词人色素上皮衍生因子 原核表达 纯化 新生血管
|
