题目：人PDGF-B基因重组真核表达载体的克隆及其转染角膜内皮细胞的研究
作者： 王传富 罗文娟
单位：青岛大学附属医院 青岛市江苏路16号
目的： 构建人PDGF-B真核表达载体,为PDGF-B基因转染真核细胞的实验研究奠定基础。方法：构建重组真核表达质粒pcDNA4-PDGF-B。撕内皮培养法简捷、快速体外培养出纯净的猫角膜内皮细胞单层。通过脂质体介导将pcDNA4-PDGF-B真核表达载体转染到猫角膜内皮细胞中，依表达报道基因pcDNA4-GFP的阳性率来确定该脂质体转染效率，转基因后72h通过RT-PCR检测目的基因在该细胞中的瞬时表达情况。MTT法检测细胞增殖状态的变化从而测定所表达蛋白的活性。结果：经基因测序证明，成功构建出pcDNA4-PDGF-B重组真核表达质粒。脂质体可介导pcDNA4-PDGF-B转染体外培养的猫角膜内皮细胞，转染效率约为30％，RT-PCR表明转基因后的猫角膜内皮细胞中PDGF-B基因的cDNA表达量明显提高。MTT法结果显示转基因后所表达的PDGF-BB蛋白促进细胞分裂增殖。结论：成功构建了pcDNA4-PDGF-B重组真核表达质粒；脂质体可介导人PDGF-B基因转染体外培养的猫角膜内皮细胞，该基因可在猫角膜内皮细胞中稳定表达并产生具有生物学活性的PDGF-BB蛋白促进细胞分裂再生。
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