促红细胞生成素介导AKT通路抑制氧化损伤诱导RPE凋亡
汪朝阳, 瞿佳，沈丽君， 周翔天 温州医学院附属眼视光医院、温州 325027
目的：确定促红细胞生成素（EPO）是否可以保护氧化损伤导致RPE凋亡及其介导的信号通路。
方法：培养人RPE细胞以各浓度EPO（0.01－100IU/ml）孵育2h后0.4mM H2O2 处理24h。荧光染料H2DCF 和MTT法分别检测活性氧ROS水平和细胞活力。分别用Hoechst 33258、Annexin V/PI、TUNEL 技术检测凋亡。Caspase－3活性、AKT (Ser473)磷酸化用western检测。并研究同时加入PI3K激酶抑制剂 LY294002和Csapase－3抑制剂Z-DEVD-FMK孵育后细胞上述改变。
结果: EPO 孵育2h可以显著降低H2O2诱导的细胞ROS水平45％,（P = 0.04），降低氧诱导细胞凋亡(从43±6%到12±3%，P = 0.002），增加细胞活力（从50% to 80%，P = 0.000）,减少Caspase－3的表达，并促进AKT 磷酸化。LY294002可以部分阻断EPO对ROS、细胞活力、Caspase－3的保护作用，和Csapase－3抑制剂DEVD合用并未表现出协调作用。
结论：EPO可以通过介导AKT途径有效保护氧化损伤诱导的RPE细胞凋亡。
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