缺氧条件下基因缄默RPE细胞缺氧诱导因子后对牛脉络膜微血管内皮细胞细胞增生、管腔形成的影响
第四军医大学西京医院眼科、全军眼科研究所 710032
赵炜，王雨生，朱洁，张鹏，惠延年，马吉献
目的：观察针对HIF-1α的shRNA对缺氧条件下RPE细胞的影响以及其条件培养基对牛脉络膜微血管内皮细胞增生、管腔形成的影响。方法：在细胞培养液中加入200µM CoCl2建立人RPE细胞缺氧模型。构建针对HIF-1α的shRNA真核表达载体转染RPE细胞。利用实时定量PCR以及Western blot观察转染组以及对照组RPE细胞HIF-1α和VEGF mRNA以及蛋白的表达，ELISA法观察两组上清液中VEGF的含量，利用MTT法和管腔形成实验观察RPE细胞条件培养液对CEC细胞增殖和管腔形成的影响。结果：和对照组相比，RPE细胞在缺氧条件下转染psh HIF-1α后， HIF-1α基因被敲除，相应HIF-1α的mRNA以及蛋白水平表达下降。转染组细胞上清中的可溶性VEGF表达受到了抑制，CEC细胞的增殖在转染组的条件培养基下增殖明显比对照组减弱，管腔成形实验显示转染组的小管长度显著低于对照组。结论：在体外对RPE细胞进行针对HIF-1α的基因缄默可以抑制CEC的血管生成活性，为脉络膜新生血管形成的治疗提供了可能的策略方向。 |
