培养的兔角膜缘上皮细胞深低温保存后的生物学活性研究．朱美玲 廖荣丰 顾起宏 沈培清 刘兴华 刘伦 李峻岭 何晓静 汪永 安徽医科大学第一附属医院.合肥：２３００２２
目的：探讨深低温保存角膜缘上皮细胞的可行性和效果。方法：取兔角膜缘小组织块，培养形成角膜缘上皮细胞单层后消化细胞制成悬液，一部分细胞按阶段降温保存在液氮里，冻存，分批取出，经复温后传代种植在无上皮细胞的羊膜上再培养；另一部分细胞不冷冻直接传代至羊膜上再培养。来比较培养的角膜缘上皮细胞深低温保存前后的形态结构和活性。将40只角膜缘干细胞损伤的模型兔随机分成单纯羊膜组、未冷冻细胞组、DMSO保存细胞组和甘油保存细胞组，用传代培养2周后的角膜缘上皮细胞作移植实验，比较深低温保存前后角膜缘上皮细胞的活性。结果：传代细胞PCNA、AE1染色呈阳性反应，AE5染色偶见阳性反应；传代细胞冻存后的比未冻存的贴壁、生长均滞后1～2天，未冻存细胞约10天左右形成单层，深低温保存后的细胞电镜检查均有不同程度细胞水肿，再培养7天后形态结构均恢复正常；传代培养细胞同种异体移植表明，冷冻后细胞移植术后角膜评分高于未冷冻细胞.结论：角膜缘上皮细胞深低温保存后仍保持上皮细胞特性，传代培养后细胞中含有较多有高增殖力的基底细胞；角膜缘上皮细胞经阶段降温后深低温保存简单可行，选择适当的冷冻保护剂冻存后的细胞再培养，其细胞活性和结构与原代相似。
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