BIGH3基因突变子R555W的定点突变及真核表达载体的构建
作者 张晶旭 马玉杰 苏晓华 黑龙江省大庆市龙南医院眼科（大庆市让胡路区爱国路35号） 大庆市 163453
目的 对我国常见的BIGH3基因相关性人角膜营养不良的热点突变R555W进行体外定点诱变研究，并构建携带有BIGH3基因突变的真核表达载体。方法 以含有BIGH3基因的克隆载体pMD18-T/BIGH3为模板，分别设计1对背对背引物，采用快速PCR定点突变技术扩增。通过双酶切将突变的BIGH3片段插入到PCI载体上，经PCR、酶切和序列测定方法鉴定重组质粒。结果 DNA测序表明,在预期位点已经发生突变,BIGH3基因在555密码子由精氨酸(R)突变为色氨酸(W)),成功实现定点突变。结论 快速PCR定点突变技术诱导定点突变,准确、高效、简便，BIGH3突变子真核表达载体的pCI/R555W-BIGH3的成功构建,为进一步进行该突变的结构与功能研究奠定了基础。
[关键词] BIGH3; 聚合酶链反应; 定点突变; 角膜营养不良; 角膜上皮蛋白; 真核表达
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