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冷冻和甘油保存方法对羊膜超微结构影响的实验研究
作者:徐国旭  文章来源:中国、江苏省苏州市三香路1055号,苏州大学附属第二医院眼科中心  点击数1403  更新时间:2007/12/4  文章录入:毛进  责任编辑:毛进
目的 羊膜移植手术在眼科临床的应用,特别是在治疗眼表疾病和较重的眼表化学伤的应用,受到越来越多的重视,为优化羊膜保存方法,改善临床疗效,对两种保存方法做了比较研究。方法 羊膜保存用以下两种不同方法:(1)将经甘油脱水处理的羊膜加盖并用胶布密封保存在4OC冰箱中,观察不同时间内羊膜的结构和活性的变化。(2)中低温保存:将制备好的羊膜组织片加入以DMEM(二甲基氩砜)培养液与同等体积的100%甘油(v/v, 1:1)配制而成的保存液中,置于-25oC冰箱内保存。本实验采用的是甘油保存及中低温保存的羊膜。光镜片:标本经固定、冲洗、酒精脱水、石蜡浸透、包埋、切片、HE染色后观察。电镜片:标本经2.5%戊二醛磷酸缓冲液前固定、逐级丙酮脱水3次、1%锇酸磷酸缓冲液后固定、环氧树脂浸透、包埋、制备超薄切片,醋酸双氧铀、枸橼酸铝电子染色后做透射电子显微镜观察。结果 羊膜在4°C冰箱内保存组,电镜下上皮形态异常、结构欠清并有细胞自溶发生;而-25°C中低温冷冻保存组羊膜上皮细胞形态正常、结构清晰、无细胞自溶现象。结果示:保存时间超过1个月后,4°C的保存条件不能维持羊膜的正常结构,而在-25°C条件下,羊膜保持良好,结构无明显破坏。结论 中低温保存方法优于4°C保存方法,可在治疗中发挥更佳作用。关键词:羊膜、保存法、电子显微镜、实验研究
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