增生细胞核抗原核酶对兔眼视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用
孟自军 河南省眼科研究所：郑州市纬五路七号 430002
目的 探讨增生细胞核抗原（PCNA）核酶(Ribozyme,Rz）对PCNA表达及细胞增生的影响,为进一步基因治疗增生性玻璃体视网膜病变提供实验基础.方法 设计构建针对PCNA的锤头状核酶(PcnaRz),通过阳离子脂质体介导转染体外培养的视网膜色素上皮细胞及成纤维细胞,观察其在细胞中的分布,应用3H-TdR掺入实验及四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验检测细胞增生及活性,应用免疫组织化学及RT-PCR技术检测细胞内PCNA表达水平,并设立裸核酶组、空载体组和空白组进行对照研究。结果 在脂质体介导下PcnaRz可成功转染RPE及成纤维细胞，较裸PcnaRz转染效率明显增高；核酶载体组细胞增生活性显著低于裸核酶组、空载体组及空白对照组；细胞生长抑制率显著提高（81.26%，P均＜0.01）；核酶载体组细胞PCNA表达水平显著低于其他组（P均＜0.01）. 结论 PcnaRz在体外能有效分解PCNA mRNA并能成功抑制培养的兔RPE及成纤维细胞中PCNA的表达,能有效降低兔RPE细胞的体外增生活性。 |
