超低温冷藏对体外培养兔角膜缘上皮细胞活性的影响
许永根，黄琛，李颖，徐永胜，王薇
（作者单位： 北京市海淀区花园北路49号，北京大学第三医院，北京大学眼科中心 100083）
【摘要】 目的: 分析超低温冷藏兔角膜缘上皮细胞活性变化。 设计 实验性研究。 研究对象 超低温冷藏兔角膜缘上皮单细胞悬浮液/兔角膜缘上皮单细胞悬浮液。 方法: 采用NIH 3T3饲细胞培养体系，将角膜缘上皮制成单细胞悬浮液后-182℃冷藏1周，复苏后行体外培养。以角膜缘上皮单细胞悬浮液为对照组。 主要指标 通过测定细胞贴壁时间，分裂周期，MTT值， 3H-胸苷值分析细胞代谢和增殖活性，测定单克隆形成率分析干细胞性，采用AE5免疫组织化学方法鉴定培养上皮细胞，HE 染色观察培养角膜上皮细胞形态， PAS 染色鉴别结膜杯状细胞。 结果: 体外培养超低温冷藏、复苏兔角膜缘上皮细胞；细胞贴壁时间和分裂周期较对照组长，单克隆形成力，细胞代谢力和增殖力较对照组弱。但两组之间差异无统计学意义。细胞形态、结构均与正常兔角膜上皮无差异,培养中均未见结膜杯状细胞。 结论: 体外培养超低温冷藏、复苏兔角膜缘上皮细胞其活性弱于对照组，但两组之间差异无统计学意义，而细胞形态和结构两组均与正常兔角膜上皮细胞相同。
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