| 目的：建立胎儿视网膜祖细胞体外培养体系。方法：取胎龄70～100天人工流产胎儿眼球，在体式镜下小心分离出视网膜神经上皮。以酶加机械吹打将所得视网膜神经上皮消化分离成单细胞，接种于预先以多聚鸟氨酸包被或未包被的培养皿中。预先包被培养皿中贴壁培养的细胞每48小时换液，于细胞接近融合时以胰酶消化传代：未包被培养皿中悬浮培养的细胞球每48小时半量换液，于细胞球直径约100～200μm大小时以胰酶加机械吹打法消化成单细胞后传代，传代后均依照原培养方法培养。通过Brd-u的掺入，并运用免疫荧光技术对细胞成分进行鉴定。结果：分离获得的细胞大部分表达神经干细胞及祖细胞标志蛋白Nestin；在两种培养条件下原代培养的细胞均可形成集落，具有增殖能力；悬浮培养的细胞球呈正球形，形态类似神经球，但传代后未见神经球样形态的细胞球出现；贴壁培养的细胞部分呈多角形、胞体大，其间可见胞体小而核相对大的圆形细胞，传代后多角形细胞增多。结论：从胎龄70～100天胎儿视网膜神经上皮中初步获得原代培养的视网膜祖细胞，为胎儿视网膜祖细胞的体外培养体系的建立打下基础。 |
