重组腺相关病毒介导的GFP基因转染大鼠角膜组织的实验研究
周炼红 邢怡桥 陈希 武汉大学人民医院 邮编 430060
本课题受到国家自然科学基金资助（No.30672290）
摘要 目的 研究穿透性角膜移植术(PK)后，重组腺相关病毒(rAAV)载体介导的GFP基因，在大鼠角膜组织中转染及表达情况。方法 32只SD大鼠作为受体，抽签法随机分成4组：A组、B组、C组、D组，每组8只。32只Wistar大鼠作为供体，沿角膜缘取全角膜，置于含10的10次方病毒基因组数/ml rAAV-GFP的DMEM/F12 1:1混合培养液中，37℃，5%的CO2培养箱培养30min。以植床直径3. 25mm，植片3.5mm行PK术。于术后第1、2、4周及3月依次取各组眼球共聚焦显微镜下观察GFP表达，Infinity软件测量内皮层中GFP表达强度。单因素方差分析统计。结果 共聚焦显微镜下GFP基因在角膜内皮中呈绿色荧光。各组强度与背景比值：A组91.83±10.83，B组128.6±4.32，C组117.3±3.01，D组118.5±3.02，C、D组较A组强、B组最强（P<0.01），C组与D组无差异（P>0.05）。结论 rAAV-GFP能够通过共培养有效地转染到角膜内皮细胞中。并在PK术后持续、稳定地在角膜内皮细胞中表达。
关键词 腺相关病毒 GFP 穿透性角膜移植 转染
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