目的 通过检测人视网膜色素上皮细胞(hRPE)吞噬视细胞外节(ROS)过程中蛋白激酶C(PKC)活性及MERTK 基因表达的变化,明确MERTK及PKC在hRPE细胞吞噬功能中所起的作用及二者的相互关系。方法用双重荧光标记法检测hRPE细胞吞噬动力学,液闪记数γ-32P放射活性法检测不同吞噬时间点的PKC活性,RT-PCR方法检测MERTK基因 mRNA水平的变化。结果于hRPE细胞结合ROS发生在15 min,吞噬ROS在24h达到饱和。胞浆及胞膜PKC活性的降低发生在5min, 24h达最低值。MERTK基因在hRPE细胞与ROS短时及长时孵育过程中均高表达。PKC活性上调后MERTK基因表达明显降低,并呈剂量依赖性。上调hRPE细胞PKC活性后行ROS长短时孵育实验所检测到的MERTK 基因表达均低于对照组。拮抗PKC活性后MERTK 基因表达增强,无剂量依赖性,继续进行ROS孵育实验所检测到的MERTK 基因表达水平在30min内增高,于90min时恢复至正常水平。结论PKC的低活性和MERTK基因的高表达是hRPE细胞摄入ROS的关键。PKC和MERTK基因均作为上游调控信号,通过两条不同的信号通路、以负相关的方式参与hRPE细胞吞噬功能的调节。 |