质粒载体携带的短发夹RNA对RPE细胞VEGF表达的影响
牡丹江医学院红旗医院眼科中心 蔡春梅 马霞 陈丽娟 代海燕 邮编：157000
目的：探讨针对人血管内皮生长因子（VEGF）的设计的短发夹RNA对体外培养人的视网膜色素上皮（RPE）细胞VEGF表达的影响。
方法：用含有人VEGF的短发夹RNA（shRNAs，V1、V2、 V3）及V4的质粒分别转染RPE细胞。实验分5组，转染24小时后在含有100μM CoCl2 DMEM培养基中培养30小时；对照组不进行转染，只在RPE细胞中加100μM CoCl2培养基中培养30小时。分别用RT-PCR和Western blot方法检测RPE细胞VEGF的在mRNA水平和蛋白水平的表达。用MTT法检测转基因RPE细胞生物活性。结果：1）提取的转基因RPE细胞的总RNA完整，无降解。RT-PCR检测结果显示，转染组的RPE细胞VEGF表达量明显减少。2）Western blot检测各组RPE细胞VEGF蛋白表达量，转染组明显低于对照组。各组间β-actin表达量无显著性差异。3）MTT法显示转染质粒后，细胞活性明显降低。
结论：针对人VEGF的特异性shRNA可以明显降低人RPE细胞VEGF的表达，为RNA干扰治疗新生血管性眼病进一步研究奠定了基础。
关键词：RNA 干扰,血管内皮生长因子，视网膜色素上皮细胞，氯化钴
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