HIF-1α和VEGF干扰性RNA抑制鼠视网膜新生血管的研究
蒋剑1 夏晓波1 许惠卓1 熊宇1 宋伟涛1 熊思齐1 李岩2
1.中南大学湘雅医院眼科 湖南长沙41008 2. Texas大学MD Anderson癌症研究中心
目的 探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）小片段干扰性RNA（siRNA）对小鼠视网膜新生血管的抑制作用。
方法 构建HIF-1α siRNA重组质粒。C57BL/6J小鼠玻璃体腔注射pEGFP-N1，1d后视网膜铺片观察GFP的表达。选7d龄C57BL/6J小鼠90只，其中17只为正常组；另73只建立氧诱导的视网膜新生血管模型，并随机分为：对照组、空载体组和基因治疗组（HIF-1α组、VEGF组和共转染组）。于出舱前1d，向空载体组小鼠玻璃体腔注射空载体质粒；HIF-1α组注射HIF-1α siRNA；VEGF组注射VEGF165 siRNA；共转染组注射HIF-1α siRNA+VEGF165 siRNA。采用荧光造影视网膜铺片方法观察血管形态变化；计算突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数；RT-PCR和Western blot检测视网膜HIF-1α和VEGF的表达。
结果 pEGFP-N1转染视网膜细胞后1d即可见GFP表达；视网膜铺片可见基因治疗组较对照组和空载体组新生血管丛明显减少，共转染组效果最明显；组织切片可见基因治疗组较其他三组突破视网膜内界膜的细胞核数量减少，差异均有统计学意义；视网膜HIF-1α mRNA及蛋白表达：对照组和空载体组较正常组上调，而HIF-1α组较对照组下调，抑制效率分别为57.4%和52.5%。VEGF mRNA及蛋白表达：对照组和空载体组较正常组明显上调，而基因治疗组较对照组明显下调，其中共转染组下调最明显，抑制效率分别为85.6%和80.9%。
结论 HIF-1α和VEGF165 siRNA均能有效抑制小鼠视网膜新生血管的形成，共转染上述两种siRNA抑制效果最为明显。
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