| 目的 利用组织工程原理体外构建角膜上皮，观察羊膜为载体培养角膜上皮移植治疗严重眼表损伤的效果。
方法
新西兰大白兔10只，取左眼角膜缘干细胞为种子细胞，以保存人羊膜为载体，体外构建复层角膜上皮，对体外构建的角膜上皮进行HE染色和免疫组化检测。
手术去除原兔右眼全部角膜缘上皮、角膜上皮及浅层基质，随机分成实验组和对照组。对实验组进行自体培养角膜上皮层移植，对照组不进行眼表重建。术后观察植片生长情况，28天处死动物，进行术眼印迹细胞学检查，并取其眼球进行常规角膜组织病理学检查和免疫组化检测。
结果
1.体外培养角膜上皮层生长情况
第14天进行HE染色，见去上皮的羊膜基底膜上有复层上皮细胞生长，共3-4层细胞连续贴附于羊膜上，细胞呈扁平或立方形。免疫细胞化学染色结果显示，羊膜载体上培养的角膜上皮细胞胞浆被染成棕黄色，即细胞正常表达角膜上皮特异性角蛋白K3。
2.培养角膜上皮层移植结果
实验组6只术后7天可见结膜充血明显，角膜缘有细小血管延伸至角膜周边，瞳孔区无新生血管，14天充血开始减退，角膜逐渐趋向透明，28天角膜表面平整稳定。对照组3只均出现角膜表面结膜上皮化。
角膜印迹细胞学检查显示实验组6只兔角膜中央为数量较多的六角型细胞，大小基本一致未见杯状细胞。对照组角膜中央可见杯状细胞。
角膜组织病理学检查显示实验组角膜上皮结构与正常生理条件下的角膜上皮结构相近，羊膜结构不清，上皮下基质层内未见炎性细胞浸润和新生血管生长。对照组角膜组织表层有较多杯状细胞，见炎性细胞浸润和新生血管形成。
角膜组织免疫细胞化学染色显示实验组角膜上皮细胞胞浆染成棕黄色，表明细胞正常表达角膜上皮特异性角蛋白K3，对照组染色阴性。
结论
利用组织工程原理以羊膜为载体体外构建的角膜上皮移植能有效治疗严重眼表损伤。 |
