| 目的：观察银杏叶提取物（EGb761）对rds小鼠视网膜神经细胞凋亡相关基因表达的影响。方法：取生育7天的rds子鼠，分为EGb761组与阴性对照组，每组16只子鼠。EGb761组给予50ul无菌0.35% EGb761腹腔注射，每天1次，阴性对照组给予50ul生理盐水腹腔注射，每天1次。两组分别于子鼠用药后14天、28天以颈椎脱臼术处死，立即摘除眼球，放入含0.1％DEPC的生理盐水中迅速取出视网膜，放入含1000ul trizol液体的冻存管中，立即置于－80℃冰箱中保存待用。取出视网膜样品，室温放置10分钟左右，使其充分裂解； 12000rpm 4℃离心5min，弃沉淀；按200ul氯仿（预冷）/1ml Trizol加入氯仿，振荡混匀后，室温放置15min，12000rpm 4℃离心5min，吸取上层水相，至另一离心管中；加入500ul异丙醇，室温放置5～10min；12000rpm 4℃离心10min，弃上清，底部即为RNA沉淀；A260/A280≥1.8为合格，所提取的RNA完整性经琼脂糖凝胶电泳鉴定，-70℃保存待用。根据小鼠的Bax，Bcl-2 mRNA序列（来自Pubmed/gene bank）,用Premier 5.0设计引物。反应条件：94℃预变性5min；94℃变性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸45sec，共40个循环；72℃后延伸8分钟。结果的计算A＝（1＋Ea）Ct1/（1＋Eactin）Ct2。结果：Real-time PCR结果显示，对照组中，bax、bcl-2基因表达28天时都明显高于14天，两者之间均有显著性差异，p<0.05。在第14天和第28天时，EGb761组bax基因都明显低于对照组，都具有显著性差异，p<0.05。而在第14天和第28天时，EGb761组bcl-2基因与对照组无显著性差异，p>0.05。结论：给予EGb761之后，bax基因表达明显降低，而bcl-2的表达与对照组无明显差别。表明在rds鼠视细胞的凋亡过程中，bax基因发挥了更为重要的作用。EGb761是通过抑制bax的表达而发挥其抗凋亡作用的。 |
