闫焱 王玲 徐国彤
目的：过氧化氢作用视网膜色素上皮细胞引起氧化应激反应是研究年龄相关性黄斑变性发病机制常用的体外模型，本研究探讨人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19氧化应激过程中泛素-蛋白酶体途径的变化。
方法：用不同浓度过氧化氢分别作用ARPE-19四小时后，提取细胞mRNA和蛋白质。半定量PCR方法检测细胞内泛素的转录水平，用细胞内羰基化蛋白水平判断过氧化氢对ARPE-19的氧化程度，western blot方法检测细胞内多泛素化蛋白和羰基化蛋白的表达水平，用细胞免疫荧光方法检测细胞内泛素化蛋白和羰基化蛋白的水平及分布情况。
结果：100至300μmol/l过氧化氢作用ARPE-19四个小时后，细胞内泛素－蛋白酶体通路激活，泛素mRNA转录水平明显上调，泛素化蛋白和蛋白酶体α亚基以及蛋白酶体β－５亚基的表达水平随过氧化氢浓度增加明显上调。氧化应激后随过氧化氢浓度增加细胞内羰基化蛋白表达在细胞浆内均匀增加，而蛋白酶体的分布有向核周聚集趋势。
结论：过氧化氢作用ARPE-19引起细胞的氧化应激过程激活细胞内泛素－蛋白酶体通路，其相关基因转录水平及蛋白表达水平上调，提示泛素-蛋白酶体途径可能参与年龄相关性黄斑变性的发病。
关键词：过氧化氢、泛素、蛋白酶体、人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19）
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