兔骨髓间充质干细胞体外分离培养、鉴定的研究
王卓实、何伟 沈阳何氏眼科医院 110034
目的：探讨体外培养兔骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells．MSCs)的方法，为进一步的实验研究打下基础。方法：选择健康家兔，于胫骨行骨髓穿刺，提取动物骨髓，采用密度梯度离心法分离提取骨髓间充质干细胞，通过贴壁培养筛选、纯化获得的MSCs，传代培养，对第2、3、4、5、6代MSCs应用MTT法测定生长曲线，分析MSCs的生长规律，对MSCs进行形态学观察，通过流式细胞仪，对CD34、CD45、CD105 三种表面抗原进行鉴定，证明所培养的细胞为MSCs。结果： 原代培养的MSCs接种12小时后开始贴壁生长，形态为均匀成梭形，生长增殖迅速，符合MSCs生长的特性，7－10天MSCs融合接近80％，传代培养生长良好。MSCs生长曲线呈S型，由生长曲线分析可知，MSCs在培养第3-7天为高速生长期，MSCs在第3-5代生长最为旺盛，并且培养的细胞经流式细胞仪鉴定，CD34（-）、CD45（-）、CD105(+)，证明所培养的细胞为较纯的MSCs。结论：应用本实验方法，可以分离、纯化培养兔骨髓间充质干细胞，所培养的MSCs体外生长稳定、增殖速度快、贴壁率高、可连续传代，可用于MSCs功能及应用的进一步研究。
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