HSV1-TK基因重组腺相关病毒载体的构建及在晶状体上皮细胞中的表达
谭浅1，丁芝祥1，刘双珍1，刘丹1，李忠庆1，彭建强2
（1.中南大学湘雅医院眼科，长沙 410078；
2.湖南省人民医院心内科，长沙 410005）
目的：构建含单纯疱疹病毒I型胸苷激酶（HSV1-TK）基因的重组腺相关病毒载体质粒pSNAV2.0-TK，制备重组腺相关病毒rAAV2/HSV1-TK，并检测HSV1-TK基因在转染晶状体上皮细胞中的整合和表达，为后囊膜混浊的基因治疗奠定基础。
方法：用基因重组技术构建含HSV1-TK基因的重组腺相关病毒载体质粒pSNAV2.0-TK，并通过PCR和酶切鉴定；该质粒转染BHK-21细胞，经G418筛选出携带该质粒的载体细胞株BHK-21/TK，在辅助病毒的参与下包装成重组病毒rAAV2/HSV1-TK；用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法和高效液相色谱(HPLC)法检测重组病毒rAAV2/HSV1-TK的纯度，用斑点杂交法检测重组病毒的滴度；重组病毒rAAV2/HSV1-TK转染兔晶状体上皮细胞N/N1003A，用PCR和RT-PCR检测HSV1-TK基因的整合和表达。
结果：经PCR和酶切鉴定重组质粒pSNAV2.0-TK构建成功；成功制备了重组病毒rAAV2/HSV1-TK，病毒滴度达1×1012v.g./ml；重组病毒转染N/N1003A细胞后，PCR和RT-PCR检测显示TK基因在细胞中整合并且有效表达。
结论：成功构建了含HSV1-TK基因的重组腺相关病毒载体质粒，制备了高滴度重组病毒rAAV2/HSV1-TK，转染该病毒的晶状体上皮细胞中有HSV1-TK基因的有效表达，为后囊膜混浊的基因治疗奠定了实验基础。
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