腺相关病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因转染体外培养的兔结膜上皮细胞的实验研究
崔红平 苏莉
（同济大学附属第十人民医院眼科，上海市延长中路301号， 200072）
[摘要] 目的 研究2型重组腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus 2, rAAV2)载体介导增强型绿色荧光蛋白基因(enhanced green fluorescent protein, EGFP) 对体外培养兔结膜上皮细胞的转染和表达情况,为rAAV2介导GFP示踪结膜上皮干细胞的增殖及分化研究提供依据。方法 体外培养兔结膜上皮细胞，rAAV2-EGFP 按感染复数(multiplicity of infection, MOI) 为104 、105 、106 转染第2 代结膜上皮细胞，转染后第1、3 、5 、7 天倒置荧光显微镜下观察细胞中EGFP 表达情况，计算转染率。MTT方法检测转染对细胞增殖的影响。结果 EGFP在细胞中表达呈绿色，弥漫于胞浆。随着MOI 值增大及时间延长，EGFP 表达效率逐渐增高，转染后7～8天达高峰并维持。MTT检测各MOI组与对照组差别无显著性意义。结论 rAAV可以介导EGFP 基因高效稳定转染结膜上皮细胞并且对细胞增殖无影响。GFP是有效的干细胞示踪手段，AAV是携带目的基因转染结膜上皮细胞的有效载体。
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