| 目的：利用小发卡环RNA(shRNA)使缺氧培养条件下的人视网膜色素上皮(RPE)细胞缺氧诱导因子1α（HIF1α）基因沉默，观察对血管内皮生长因子(VEGF)及色素上皮衍生因子(PEDF)的影响，探讨使缺氧条件下RPE细胞HIF1α基因沉默能否有效地抑制RPE细胞VEGF的表达和促进PEDF的表达。方法 通过使用化学缺氧诱导剂CoCl2模拟RPE细胞缺氧环境，体外转录法合成针对HIF1αmRNA序列的两个靶点的shRNA，对缺氧(150μMCoCl2模拟)的培养条件下人RPE细胞的HIF1α进行干扰，通过RT-PCR检测HIF1α和VEGF的表达，使用Western印迹分析检测HIF1α和VEGF蛋白水平。结果 针对HIF1αmRNA的两种shRNA均能有效地抑制RPE细胞在缺氧条件下HIF1α的表达，同时也有效地抑制VEGF mRNA和蛋白表达，并促进PEDF蛋白表达，但对PEDF mRNA无影响。结论 针对HIF1α mRNA的shRNA能有效地使缺氧条件下RPE细胞HIF1α基因沉默，进而有效地抑制缺氧对VEGF的上调作用，同时也促进PEDF表达。结果也揭示HIF1与缺氧条件下PEDF翻译后的下调机制有关，是促进视网膜新生血管形成最为关键的细胞因子。 |
