诱导人羊膜上皮细胞向角膜上皮细胞转分化的实验研究
陈剑，刘小勇，周清 ，吴静，徐锦堂
(暨南大学附属第一医院眼科 广东广州 510630)
【摘要】 目的 探索人羊膜上皮细胞在表层角膜基质诱导下向角膜上皮细胞转分化的可能性。
方法 取足月产人羊膜，通过胶原酶II、胰蛋白酶和EDTA消化获得人羊膜上皮细胞(hAECs)，将细胞接种于含10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基中培养扩增、传代，进行原代和传代培养，每天在倒置显微镜下观察培养。将2～3代hAECs，接种于去上皮的兔角膜基质上培养，待hAECs融合形成单层后，置于插入式培养皿中进行气液界面培养14天。对角膜基质上培养的hAECs进行HE、扫描电镜、透射电镜进行形态学及超微结构观察，以及角蛋白CK12的免疫组织化学检测。
结果 HAECs可在体外成功的培养传代，体外可连续传6～8代。体外培养的细胞呈多角形，长满后呈上皮细胞特有的铺路石样外观。HAECs可在角膜基质上生长，培养1～２天可形成单层，气液界面培养１4天可形成４～５层细胞的复层上皮，所形成的复层结构与正常角膜上皮相似。扫描电镜观察细胞表面有丰富的微绒毛，透射电镜下可见上皮细胞之间有桥粒连接， 免疫组化检测复层细胞表达角膜上皮特征性角蛋白CK12。
结论 人羊膜上皮细胞在一定条件下经表层角膜基质的诱导可转化为角膜上皮细胞。
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