目的：利用蛋白质紫外吸收光谱及蛋白色氨酸残基紫外吸收光谱因蛋白质二级结构变化而发生谱线变化的原理，评价波长308nm的B波段紫外辐射（Ultraviolet B，UV-B）激光照射对α晶状体蛋白结构的影响。
方法：用凝胶层析法（Sephacryl S－300 HR）提纯牛眼晶状体的α晶状体蛋白。纯化的α晶状体蛋白在0.1mg/ml浓度的溶液状态下，用UV-B（308nm）激光在单脉冲能量95mJ下对放置在石英比色皿中的α晶状体蛋白水溶液进行照射，变化脉冲数及改变照射的能量密度。空白对照为样品Buffer液。测量照射前后样品及对照品的蛋白紫外吸收光谱及色氨酸荧光光谱以判断α晶状体蛋白二级结构的变化。
结果：α晶状体蛋白紫外（280nm）吸光度随UV-B激光脉冲数的增加而减少，色氨酸荧光（激发光290nm，探测330nm荧光）在20个激光脉冲照射以上，随脉冲数增加而减少，N-甲基犬尿氨酸（N-FK）荧光（激发光330nm，探测440nm荧光）在20个激光脉冲照射以上，随脉冲数增加而增加。不同能量密度的激光照射后，色氨酸荧光随激光能量密度的增加而减少，而N-FK荧光随激光能量密度增加而减少。
结论：UV-B激光可造成色氨酸荧光减少及N-FK荧光的增加。推测α晶状体蛋白吸收紫外线辐射，色氨酸氧化形成N-甲基犬尿氨酸，从而造成α晶状体蛋白结构变化。 |
