人眼玻璃体蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立及优化
张雯 张学东 李琦
重庆医科大学第一附属医院眼科
重庆市
【摘要】目的:优化并确立人眼玻璃体液蛋白质组分析所需的双向电泳技术方法。方法:通过重庆市眼库采集14只健康捐献眼的玻璃体液（采集时间均在捐献者死亡后24小时以内）,在眼球冷冻状态下切除眼前段组织包括晶状体及部分与其相邻的玻璃体，从玻璃体腔中心部取出玻璃体液。对玻璃体液进行裂解并经过丙酮沉淀使样品蛋白质得到纯化及浓缩，提取可溶性蛋白质，以17cm固相pH梯度预制胶条（IPG）进行一向等电聚焦，实现蛋白质的等电点分离，以均匀SDS聚丙烯酰胺凝胶进行二向垂直凝胶电泳，实现蛋白质的相对分子量分离，最后对凝胶进行硝酸银染色，分析玻璃体蛋白质的分离效果。结果：通过调整样品处理方法、一向等电聚焦步骤、二向电泳的电流大小及银染方法，建立了稳定的玻璃体液双向电泳技术流程。以pH4-7的线性IPG进行一向等电聚焦，以12%SDS均匀胶进行二向垂直凝胶电泳，可获得人玻璃体组织分布均匀的双向凝胶电泳图谱并分离出了500多个蛋白点，蛋白点清晰，形态规则，凝胶图谱的重复性好。结论：该优化的技术流程能有效提取并分离眼玻璃体蛋白质，为进一步研究玻璃体相关疾病的差异蛋白质组奠定了基础。
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