先天性遗传性核性白内障致病基因的克隆及其在体外真核细胞的表达
郑建秋 刘平 付松滨
哈尔滨医科大学第一临床医学院眼科医院，150001 哈尔滨
通讯作者 付松滨，Email: fusb@ems.hrbmu.edu.cn
目的 克隆一个先天性遗传性核性白内障家系致病基因Val64Gly突变型mGJA8,研究该基因野生型和突变型在体外真核细胞系中的表达。探讨新生突变所致白内障表现型同遗传型的相关性。
方法 将致病基因突变型和野生型，构建pEGFP-N1- GJA8重组表达质粒，然后用限制性内切酶消化和DNA测序鉴定。将携带绿色荧光蛋白重组表达质粒pEGFP-N1-wt hCx50和pEGFP-N1-hCx50V64G，分别在体外转染真核细胞，用荧光显微镜观察蛋白表达情况。
结果 经酶切和DNA序列测定鉴定证实pEGFP-N1- GJA8重组质粒构建成功。荧光显微镜观察w GJA8和m GJA8目的基因均成功表达，pEGFP-N1-wt hCx50在细胞膜上表达，pEGFP-N1-hCx50V64G在细胞质中表达。立体三维结构显示第64位氨基酸结构改变。
结论 成功克隆先天性白内障致病基因, 成功完成了致病基因在真核细胞中的蛋白表达的情况，并为研究突变基因的氨基酸改变产生的蛋白结构改变，导致相应临床表现型提供了重要依据。
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