腺相关病毒-8介导绿色荧光蛋白基因转染大鼠角膜基质细胞的体外研究
汤明芳 广州南方医院眼科（510515）
摘要：目的 研究8型重组腺相关病毒(rAAV8)载体介导的绿色荧光蛋白 (GFP) 基因对原代培养大鼠角膜基质细胞的转染效率和对细胞生长的影响,为rAAV8携带目的基因治疗角膜病提供理论依据。方法 原代培养大鼠角膜基质细胞,按不同转染倍数（MOI）的rAAV8－GFP转染角膜基质细胞,转染后在倒置荧光显微镜下观察细胞中GFP的表达和细胞生长形态；流式细胞仪检测rAAV8-GFP对基质细胞的转染率；MTT法检测对细胞生长的影响。结果 转染（MOI=5×105）2d , 细胞中的GFP开始表达,表达强度随MOI值的增高而增强,随着时间延长而增强,转染后7d达高峰,随后逐渐减弱。转染7d，流式细胞仪检测rAAV8-GFP对基质细胞的转染率为31.47%（MOI=5×103 ），42.52%（MOI=5×104），49.13%（MOI=5×105）。转染后1，2d细胞生长及形态正常,MTT法显示各转染组与未转染组的OD值无统计学差异。结论 rAAV8-GFP对大鼠角膜基质细胞转染率近50%；对细胞生长无明显抑制。 rAAV8作为角膜病基因治疗的载体是安全可行的。
关键词：腺相关病毒；绿色荧光蛋白质类；角膜基质细胞；基因转染
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