[1]题目：野生型及V546D突变型TGFBI基因真核表达载体的构建
[2]作者：曹文萍 刘平
[3]单位．城市：哈尔滨医科大学附属第一临床医学院眼科三病房(150001)
[4]目的：构建人野生型及V546D突变型TGFBI基因真核表达载体。
[5]方法：应用RT-PCR技术从培养的人肾癌细胞系中克隆得到野生型TGFBI基因的cDNA序列，亚克隆到pMD18-T中，PCR介导的定点突变技术构建V546D突变型TGFBI基因并进行DNA测序鉴定。将野生型及V546D突变型的pMD18-T-TGFBI与pcDNA3.1表达载体空质粒分别进行限制性内切酶双酶切，使目的片段定向克隆到真核表达载体pcDNA3.1中，经PCR、酶切和序列测定鉴定重组质粒。
[6]结果：获得了人野生型TGFBI基因的cDNA序列全长，并成功构建了人野生型和V546D突变型TGFBI基因真核表达载体。
[7]结论：成功构建了人野生型和V546D突变型TGFBI基因真核表达载体，为下一步建立细胞模型,研究突变型TGFBI基因的生物学功能以及TGFBI基因在角膜营养不良发病机制中的作用奠定了基础。
|
