目的 应用显微傅里叶变换红外光谱(FT-IR)技术研究视网膜的生物化学组成,与形态学结合,直接从分子水平获取视网膜结构组成的信息,探索一种研究视网膜的新方法。
方法 在显微FT-IR仪下分别选取正常Wistar大鼠4只(共8只眼)视网膜冰冻切片上同一部位的感光细胞外节(OS)、外核层(NL)和内丛状层(PL),分别测定微区大小30μm*200μm的反射FT-IR吸收光谱。分析谱图中主要吸收峰的位置、强度和来源,分析谱图中主要吸收峰的位置、强度和来源,分析视网膜此三层结构的化学组成及差异。
结果 正常大鼠视网膜FT-IR谱图重复性好,且三层FT-IR谱图差别明显,说明三层所含化学成分存在较大差异,这与三层本身结构组成特点一致。OS层含有大量结构,所以相应的特征吸收峰1738cm-1吸收值最大,且因为含有大量不饱和脂肪酸,曲线拟合后3014cm-1(=C-H)谱带的面积最大。NL层由细胞核组成,组织密集,各种成分均较多,尤其是含有较多的核酸和蛋白质,谱图中代表核酸的1243 cm-1和1089 cm-1以及代表蛋白质的酰胺I带和酰胺II带的吸收值,NL都是最大的。PL主要是神经的轴突和树突结构,组成稀疏,各成分均较少,但膜脂与核酸和蛋白质的比例3014/3295(=C-H/NH)在OS与NL之间。
结论 显微FT-IR技术对视网膜各层的化学成分分析提供了大量可靠的信息,是一种可行且停定靠研究视网膜疾病机制的新方法。外界因素引起的视网膜病变,可通过显微FT-IR方法分析视网膜某层和某特定化学结构的改变,从而为发病机制和治疗方法研究提供非常有意义的信息。 |