| 目的：研究CD4+CD25+和CD8+CD103+调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）在同种异基因角膜移植免疫排斥中的表达变化及其下游细胞因子的表达改变。方法：实验组以BALB/c（H-2d）小鼠为受体、C3H/He（H-2k）小鼠为供体，建立同种异基因角膜移植模型；对照组受体及供体均为BALB/c小鼠，观察术后植片的存活率、排斥反应时间；组织病理学检查术后3天、7天、4周及8周各时间点角膜植片中炎症细胞浸润与角膜新生血管生成；流式细胞仪检测术前、术后3天、7天、4周及、8周各时间点受体外周血和脾脏中CD4+CD25+Treg及CD103+CD8+Treg的表达变化；同时ELISA检测血清与房水中IL-10、IL-4、IFN-γ及IL-1β的表达变化。结果：实验组角膜植片免疫排斥发生时间为7天~4周，平均存活时间为（14.79±1.02）天，对照组术后植片保持透明，观察期（8周）内未发生排斥反应，存活时间显著长于实验组（χ2＝46.934，P=0.000）差异有统计学意义。流式细胞仪检测显示对照组外周血CD4+CD25+ Treg术后各时间点的表达分别为（3.36±0.29）%、（4.09±0.44）%、（5.44±0.35）%、（5.73±0.53）%，显著高于实验组的（2.50±0.39）%、（3.24±0.25）%、（4.20±0.45）%、（4.18±0.14）%，（t＝3.828、2.898、3.780、4.892，P均<0.05）差异有统计学意义，两组脾脏中CD4+CD25+ Treg的表达上调先于外周血；术后各时间点实验组外周血内CD8+CD103+ Treg的表达分别为（2.20±0.33）%、（2.79±0.57）%、（4.55±1.03）%、（4.31±0.07）%，显著高于对照组的（0.73±0.12）%、（1.10±0.19）%、（1.43±0.14）%、（2.10±0.14）%，（t＝7.133、4.876、5.196、19.96，P均<0.05）差异有统计学意义，两组脾脏CD8+CD103+Treg的表达上调先于外周血。实验组术后各时间点血清内IL-10与IL-4水平均显著低于对照组（t＝3.203、3.141、3.012、2.869与2.34、6.681、8.839、8.574，P=0.011、0.012、0.013、0.019与0.053、0.000、0.000、0.000）差异有统计学意义；实验组术后血清内IFN-γ与IL-1β含量上调，各时间点的表达水平均高于对照组，（t＝3.508、3.265、4.402、5.539与3.63、5.796、1.728、0.66，P =0.006、0.011、0.002、0.000与0.005、0.000、0.115、0.524），除术后4周、8周的IL-1β，余差异有统计学意义。房水中各细胞因子的表达改变与血清中变化相似。结论：CD4+CD25+Treg表达上调并伴随血清与房水中IL-10、IL-4表达上调，对于角膜植片的存活具有保护意义，而CD8+CD103+Treg的表达上调伴随IFN-γ、IL-1β的含量增加，则参与异基因角膜移植免疫排斥反应的过程。 |
