| 目的 通过与含低浓度牛血清的常规MEM和DMEM基础培养基比较，观察内皮细胞培养基（endothelial cell medium, ECM）和无动物细胞成分培养基（animal compound freemedium, ACF）在无血清器官培养法保存角膜内皮细胞活性方面的效果。方法 选择兔和大鼠角膜各80只，密闭保存于含或不含2%FBS 的四种待检培养基中4周，再葡聚糖T500脱水2d。角膜内皮细胞活性检测内容包括：①保存前后角膜内皮细胞密度；②兔角膜厚度测量；③兔角膜内皮层中肌动蛋白微丝（filament actin, F-actin）和去上皮大鼠角膜中胞质紧密粘连蛋白1（zonula occludens-1, ZO-1）的表达水平，以评估内皮细胞间紧密连接的屏障功能；④透射电镜下兔CEC的超微结构变化。结果 保存结束并脱水2d后，ECM+2%FBS组的角膜内皮细胞密度最高（兔2123±481个/mm2，大鼠2258±418个/mm2），ECM和ACF组结果与其接近，内皮细胞死亡率也较低，MEM+2%FBS对照组细胞密度最低（兔1732±313个/mm2，大鼠1875±347个/mm2）。保存后角膜冰冻切片显示，所有兔内皮层都有F-actin表达，所有大鼠内皮层都有ZO-1表达。WB和RT-PCR半定量检测表明，两者在各保存组的表达趋势与该组的内皮细胞密度结果一致。ECM和ACF保存组内皮细胞的超微结构与正常角膜间区别最小。结论 在器官培养法保存角膜过程中，ECM和ACF培养基可以比常规含低浓度血清的MEM和DMEM培养基更好地保持内皮细胞活性，因此在无血清器官培养保存角膜方面极具应用前景。 |
