| 目的 探讨人胚胎角膜内皮细胞条件培养液（conditioned medium of human embryonic corneal endothelial cells ，hECECs-CM）对人胚胎角膜内皮细胞（human embryonic corneal endothelial cells ，hECECs）体外生长增殖的影响。方法 将生长汇合达80%的原代hECECs用0.125g?L-1 胰酶/0.53 mmol ?L-1EDTA传P1代分5组接种于96孔板，第2天换DMEM/F12 含10% FBS（对照组）、和hECECs-CM(按1:1,1:2,1:4,1:8体积比稀释)；MTT法检测细胞增殖情况；免疫荧光法及PCR法对hECECs进行初步鉴定；BCA蛋白定量试剂盒检测胚胎角膜基质细胞条件培养液中蛋白含量；SPSS 11.5软件包对数据进行统计学分析。结果 MTT法检测DMEM/F12含10% FBS和4组hECECs-CM培养的OD值分别为0.1491±0.013367、0.42386±0.012224、0.39148±0.061322、0.35958±0.05636和0.33684±0.037544，多组方差分析显示， 1:1 hECECs-CM组与1:4,1:8 hECECs-CM和对照组两两比较差异均有统计学意义（P<0.05）；免疫荧光结果显示hECECs呈NSE、nestin和Ki67抗体染色阳性；PCR检测Na-K-ATP酶和ZO-1基因水平表达高于角膜基质细胞；BCA蛋白定量结果显示hECECs-CM中总蛋白浓度为1347.25
mg?L-1，按推算含650 mg?L-1蛋白成份的hECECs-CM对角膜内皮细胞的增殖有促进作用。结论 hECECs-CM对hECECs的体外生长增殖有促进作用，其应用和其中活性成份分析有待进一步的研究。 |
