| 目的 观察雷帕霉素（rapamycin, RAPA）对体外培养的人脐静脉内皮细胞株EA.hy926间质转化及其分泌基质金属蛋白酶（MMP）的影响，探讨RAPA抑制新生血管形成的机制。 方法 体外培养EA.hy 926，细胞达到完全融合后用100μl微量移液头在96孔板内垂直划痕，继续培养8h、24h、72h。观察划痕内细胞形态变化，免疫荧光检测VE-钙黏蛋白、波形蛋白和细胞转型调控因子Twist表达变化。细胞划痕后，在不同浓度的RAPA（10、100、1000 ng/ml）中培养8h；研究细胞迁移能力的变化；RT-PCR检测VE-钙黏蛋白、波形蛋白和Twist表达变化。四氮唑蓝比色法（MTT法）检测不同浓度的RAPA对细胞增殖的影响；明胶酶谱法检测明胶酶MMP-2、MMP-9的表达变化。 结果 人脐静脉内皮细胞融合后形成铺路石样单层，划痕后内皮细胞发生迁移并趋向于再次形成铺路石样单层。在此过程中内皮细胞发生间质转化并获得迁移能力，同时迁移的内皮细胞表达Twist。10ng/ml、100ng/ml 浓度的RAPA不影响细胞的增殖，72h时1000ng/ml RAPA开始抑制细胞增殖；不同浓度的RAPA均抑制内皮细胞的迁移，促进VE-钙黏蛋白的表达，抑制波形蛋白和Twist的表达，从而抑制内皮间质转化。明胶酶谱法检测发现不同浓度的RAPA均可抑制内皮细胞分泌MMP-2和MMP-9。 结论 RAPA可能通过抑制内皮细胞间质转化抑制细胞的迁移，抑制MMP-2和MMP-9的分泌表达从而抑制细胞外基质的降解，通过这两条途径抑制新生血管的形成。 |
