目的 本实验通过比较遗传性视网膜色素变性大鼠RCS病变大鼠和正常对照大鼠生后发育过程中视网膜大体形态和神经节细胞单细胞形态学特征,了解感光细胞变性过程中内层和外层视网膜形态改变有无差异。
方法 本课题采用HE染色方法对RCS病变与正常对照大鼠在生长过程中视网膜形态改变进行观察比较,在对不同发育阶段大鼠RGCs行膜片钳全细胞记录的同时,进行细胞内荧光黄(Lucifer Yellow,LY)标记,荧光显微镜观察,研究大鼠生长过程中RGCs的形态学特性,并对两种不同动物模型进行比较。
结果 一、视网膜组织形态观察:1.睁眼前RCS病变与正常对照大鼠相比视网膜发育速度基本一致,该时期RCS病变大鼠视网膜未见明显异常。2.出生后20天RCS大鼠感光细胞内节开始变窄,部分细胞内节消失;35天时,RCS大鼠感光细胞(PRC)胞核浓缩;60天时,仅残留少许PRC;80天时几乎无PRC保留, RPE层细胞增殖,排列紊乱,并有毛细血管穿过。在整个发育过程中RCS大鼠视网膜内核层、神经节细胞层外观基本正常
二、神经节细胞的形态学观察:对两种大鼠单峰型、瞬变型和持续型三种RGCs成功行细胞内染色标记。RCS病变与对照大鼠不同发育阶段单峰型、瞬变型和持续型细胞胞体大小、树突分枝数量、形态及范围无显著差别。与变性早期相比,RCS大鼠病变晚期RGCs细胞形态未见明显改变。
结论 1.RCS病变及正常对照大鼠视网膜结构随年龄的增长程序化发育,约于出生后4周时达成年水平。2.RCS病变大鼠视网膜感光细胞进行性变性死亡。3.在整个变性的过程中光镜下观察内核层和神经节细胞层细胞保持着较正常的形态,但其功能如何,尚需进一步研究。4.三种AP类型的RGCs在三种大鼠均成功标记,在出生后发育的不同阶段,RCS病变与对照大鼠各类型RGCs相比形态无显著差别。5.在RCS大鼠感光细胞完全变性死亡之后内核层和神经节细胞层细胞尚未见明显改变,提示视网膜变性疾病中视网膜各层神经元形态改变存在着不一致性,内层神经元功能状态如何以及细胞膜受体、超微结构、突触功能联系等有无改变,尚需进一步的研究 。
[国家自然科学基金资助项目(30270457)]
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