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Lucentis对高糖条件下的人原代培养的视网膜色素上皮细胞屏障的影响
作者:李建桥  文章来源:山东大学齐鲁医院玻璃体视网膜实验室  点击数445  更新时间:2011/9/13 11:58:00  文章录入:毛进  责任编辑:毛进

目的 探索Lucentis对高糖条件下原代培养的人视网膜色素上皮细胞屏障的影响。
方法 对人视网膜色素上皮进行原代培养并鉴定,第3代细胞接种于Polyester(PET)膜上,不同时间点在相差显微镜下对滤膜表面观察,通过紧密连接相关蛋白Occludin的表达间接反映细胞之间紧密连接的形成;跨膜电阻(TER)检测屏障的稳定性,并通过测量正常培养条件和5ng/ml的血管内皮生长因子(VEGF)干预下辣根过氧化物酶(HRP)通透性的改变反映屏障特性。2周屏障形成后,分成正常培养组,高糖干预组(30mmol/lGLU)、高糖联合Lucentis干预组,观察处理后24、48小时后, 测量HRP通透性和TEER,并从mRNA和蛋白水平上检测紧密连接蛋白occludin的表达变化。
结果 培养人视网膜色素上皮细胞纯度达98.8%。可形成良好的单层屏障;单层细胞的通透性检测结果显示,HRP从滤膜上方到达下方随时间延长呈线性增加,且在VEGF的干预下,通透率明显增加(P<0.05);高糖干预24、48小时后,三组的TEER差异有统计学意义,在mRNA和western水平上均可见高糖+Lucentis组的occludin明显增加。     
结论 Lucentis 对原代培养的视网膜色素上皮细胞屏障具有一定的保护作用,可以初步阐释临床糖尿病黄斑水肿经过Lucentis治疗后视网膜厚度减少的可能机制。

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