目的 利用双向电泳技术比较正常成、幼年Long Evans大鼠初级视皮层蛋白表达差异,探索视觉发育过程中初级视皮层蛋白质表达的变化规律。
方法 取22天龄和100天龄Long Evans大鼠各2只,过量注射20%氨基甲酸乙酯处死,迅速取脑,在低温保持器中将枕部皮层切成200µm的额状切片,使用刮胡刀片手工切除白质;取灰质放入裂解液中匀浆,室温静置1小时抽提初级视皮层总蛋白,15000g离心1小时除去细胞碎片;取上清使用三氯乙酸/丙酮沉淀蛋白除去盐及脂类杂质,丙酮清洗蛋白沉淀除去残留三氯乙酸,使用溶涨液将蛋白沉淀完全溶解,室温静置1小时后14000g离心30分钟;双向电泳分离初级视皮层总蛋白,将得到的胶块银染,比较两组大鼠初级视皮层蛋白表达差异。
结果 胶图差异分析发现幼年鼠初级视皮层中有16个蛋白质点表达较丰富,成年鼠初级视皮层中有12个蛋白质点表达较丰富。
结论 正常成、幼年Long Evans 大鼠初级视皮层蛋白质组存在差异,幼年Long Evans 大鼠初级视皮层表达较丰富的蛋白主要为轴突导向、生长及细胞骨架相关蛋白,成年Long Evans 大鼠初级视皮层表达较丰富的蛋白主要是一些抑制轴突生长的蛋白,这种差异提示幼年初级视皮层表达较丰富的蛋白可能与眼优势柱的可塑性有关,成年初级视皮层表达较丰富的蛋白可能与眼优势柱可塑性的终止有关,这种差异将有助于眼优势柱可塑性及其终止机制的进一步研究。
关键词:视皮层蛋白,双向电泳
国家杰出青年科学基金资助课题(No:30025014)
|