目的 比较不同培养天数的大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)形态学与电生理功能,研究培养过程中视网膜神经节细胞形态与功能改变的相关性。
方法 采用出生后0-2天Long Evans大鼠,取视网膜培养神经节细胞,分别于培养后1天、3天、5天、7天观察神经节细胞形态,并行膜片钳全细胞记录研究其静息膜电位、输入阻抗和动作电位(AP)的阈值、幅度及频率,比较在不同培养时间的RGCS形态与功能特性。
结果 1.对培养的大鼠视网膜神经节细胞,观察到与急性分离的RGCs的相似的胞体和突起形态;并对体外培养的RGCs的膜片钳全细胞记录,记录其静息膜电位、输入阻抗,成功引出AP,根据AP的形态RGCs可分为单峰型、瞬变型和持续型三种类型的RGCs。
2.不同培养时间的神经节细胞形态、电生理功能差异较大,随着培养时间的延长,静息膜电位和输入阻抗逐渐下降,AP幅度升高、阈值降低,动作电位的频率(以持续1s的时间内动作电位发放的次数计算)增快。但是培养5天以后的RGCs电生理特性不稳定,静息膜电位水平、动作电位的频率波动较大。
结论 1.成功完成Long Evans大鼠视网膜神经节细胞的培养,胞体和形态同在体,提示培养的方法可行。随培养时间延长,RGCs胞体增大,突起增多、增长。
2.随培养时间延长,RGCs的电生理特性逐渐发生改变。 5天培养后的RGCs生理功能不稳定,更易受到培养条件的影响。
关键词:视网膜神经节细胞,体外培养,膜片钳全细胞记录
[国家自然科学基金资助项目(30270457)]
|