目的  苯扎氯铵是目前临床使用的滴眼液中常添加的防腐剂。本研究拟探讨苯扎氯铵对体外培养的人角膜上皮细胞（human corneal epithelial cells，HCEs)DNA损伤、活性氧（reactive oxygen species，ROS）、细胞存活率及细胞凋亡的影响，以及透明质酸对苯扎氯铵所致的人角膜上皮细胞DNA毒性效应的保护作用。

方法  用浓度为0.00005%、0.0001%、0.0005%及0.001%的苯扎氯铵分别作用于体外培养的人角膜上皮细胞30分钟，另一组细胞采用0.2%透明质酸与不同浓度苯扎氯铵联合作用30分钟。应用MTT法检测细胞存活率；用Annexin V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡；碱性彗星实验用于检测以DNA单链断裂（DNA single-strand breaks，SSBs）为主的DNA损伤；用免疫荧光法检测细胞核内磷酸化的H2AX（gamma H2AX）焦点形成，以评估以DNA双链断裂（DNA double-strand breaks，DSBs）为主的DNA损伤情况及严重程度；以乙酰乙酸双氯荧光素（DCFH-DA）为探针，应用流式细胞仪检测细胞内ROS水平。

结果  MTT结果表明，0.001%苯扎氯铵可导致显著的细胞存活率下降（P<0.001），凋亡实验也显示，仅0.001%苯扎氯铵可致显著的HCEs细胞凋亡（P<0.001）。而碱性彗星实验则显示，四个浓度的苯扎氯铵均可导致显著的HCEs细胞核SSBs（P<0.001）。免疫荧光法也发现不同浓度的苯扎氯铵处理后HCEs细胞核内含有gamma H2AX焦点的细胞比例及焦点数均较对照组显著增加（P<0.05），表明苯扎氯铵可导致HCEs细胞核DSBs形成。同时，随浓度的增加，苯扎氯铵所致的DNA损伤加重。流式细胞仪检测表明，不同浓度苯扎氯铵处理后的HCEs细胞内ROS水平较对照组增高，差异有显著性（P＜0.001）。而透明质酸则可显著抑制由不同浓度苯扎氯铵所致的HCEs细胞存活率下降、细胞凋亡、DNA损伤及细胞内ROS水平增高。

结论  苯扎氯铵可导致HCEs细胞核DNA损伤并影响细胞活性。苯扎氯铵所致的细胞内ROS增加可能与DNA损伤相关。透明质酸可抑制苯扎氯铵所致的角膜上皮细胞DNA损伤、ROS增加及细胞凋亡。