目的 探讨中药玉屏风散对感染期、潜伏期及复发期单纯疱疹病毒性角膜炎(herpetic simplex keratitis, HSK)模型小鼠细胞免疫功能的影响,以阐明其抗HSK复发的作用机制。
方法 100只Balb/c小鼠分别经角膜划痕法接种Ⅰ型单纯疱疹病毒(herpes simples virus type-Ⅰ, HSV-Ⅰ),建立HSK原发感染小鼠模型后随机分为玉屏风散组、玉屏风散+阿昔洛韦组、阿昔洛韦组、空白对照组四组,每组25只。另取25只小鼠对角膜只划痕不接种HSV-I作为正常对照组。然后,对所有HSK原发感染小鼠模型分别给予0.1%阿昔洛韦滴眼液局部治疗2周,使其HSK临床表现消失并建立HSK潜伏小鼠模型后,分别给予相应的药物和等量生理盐水灌胃治疗3周。其具体给药方法:玉屏风散组:每日玉屏风散煎液灌胃;玉屏风 散+阿昔洛韦组:玉屏风散煎液和阿昔洛韦片混合药液灌胃;阿昔洛韦组:阿昔洛韦片生理盐水溶解液灌胃;空白对照组:等量0.9%生理盐水灌胃;正常对照组:等量0.9%生理盐水灌胃。每只模型小鼠的喂药量按每 100g 体重 1ml 计算,每天1 次,并每周称1次体重,以调整给药剂量。治疗时间为病毒接种后的第28天开始至第49天结束,连续3周。病毒接种7周后用紫外线B光照射各组模型小鼠角膜诱导HSK复发。分别于接种病毒后的第28天、49天,紫外线照射后的第3、7、14天各组随机抽取模型小鼠5只,麻醉后摘取脾脏,提取T淋巴细胞,以流式细胞术分析各小鼠模型组T 细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)百分比及单纯疱疹病毒侵入介质( the herpes virus entry mediator,HVEM )的改变;取外周血清应用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)测定各组Th1细胞因子:IL-2、γ- IFN,Th2细胞因子:IL-4、IL-10含量的改变,以确定玉屏风散对HSK模型小鼠细胞免疫功能的影响。
结果 HSK潜伏期模型小鼠组与正常对照组比较,外周血CD3+、CD4+T淋巴细胞显著降低,CD8+T淋巴细胞及HVEM的表达显著升高,CD4+/CD8+显著降低,血清Th1细胞因子IL-2、γ- IFN的水平显著降低,Th2细胞因子IL-4、IL-10的水平显著升高,(P<0.01)。
潜伏期HSK模型小鼠药物治疗3周后及紫外线B光诱导复发后第3、7、14天,玉屏风散组、玉屏风散+阿昔洛韦组分别与阿昔洛韦组和空白对照组比较,CD3+、CD4+T淋巴细胞的表达明显增加,CD8+ T淋巴细胞及HVEM的表达明显降低;IL-2、γ- IFN的表达水平显著增高,IL-4、IL-10的表达水平显著降低,(P<0.01);
结论 感染期和潜伏期HSK模型小鼠存在着机体细胞免疫系统功能紊乱和低下,玉屏风散或玉屏风散+阿昔洛韦治疗,具有调节和改善潜伏期和复发期HSK模型小鼠细胞免疫功能,增强其抗HSK复发的作用。 |