目的 探讨Y27632在体外诱导成人视网膜色素上皮(RPE)细胞转分化为神经元样细胞的可行性。
方法 取生长良好的第3~6代成人RPE接种于6孔培养板,细胞贴壁生长后分为对照组和实验组,对照组培养基为2%胎牛血清(FBS)+ Dulbecco 改良Eagle培养基(DMEM)/F12培养液,实验组在此培养基中加入10μmol/L Y27632。于诱导3h、6h、1d、3d、5d和7d观察细胞形态,并用细胞免疫荧光染色法鉴定诱导后3d实验组和诱导组角蛋白CK18、微管相关蛋白Map2、神经丝蛋白NF200、Pax6的阳性表达率,两组间的比较采用χ2检验。
结果 实验组经诱导后RPE细胞发出轴突样突起并相互连接成网状,呈现典型的神经元细胞形态,占50.1%。对照组RPE和实验组细胞角蛋白表达阳性率分别为93.97%和43.88%,两组比较,差异有统计学意义(χ2=64.763,P<0.01);Map2对照组和实验组阳性率分别为4.49%和31.90%,两组比较差异有统计学意义(χ2=23.634,P<0.01);NF200对照组阳性表达率为22.37%,但阳性表达细胞形态为类圆形,实验组阳性率表达为57.45%,大量细胞发出轴突样突起,两组间差别有统计学意义(χ2=21.261,P<0.01);Pax6对照组和实验组细胞阳性率分别为8.33%和65.79%,两组比较差异有统计学意义(χ2=25.946,P<0.01)。
结论 Y27632体外诱导成人RPE细胞出现神经元样细胞,是一种可行的诱导方法。 |