目的 探讨以腺相关病毒(AAV)为载体对体外培养的人虹膜色素上皮细胞(IPE)进行色素上皮衍生因子(PEDF)转染,获得高效表达PEDF转基因细胞的可行性。
方法 构建携带PEDF基因的重组腺相关病毒(AAV)载体AAV-PEDF,体外培养人IPE,用浓缩的病毒感染体外培养的IPE,荧光显微镜下观察细胞表达绿色荧光蛋白情况,并用流式细胞术检测细胞转染效率;RT-PCR、Western blotting等方法鉴定PEDF在IPE中的表达。
结果 AAV-PEDF转染后,IPE生长正常,用荧光显微镜、RT-PCR、Western blotting等均能检测到PEDF表达,在转染倍数(MOI)为20时,细胞感染阳性率可达64.2%。
结论 AAV-PEDF能有效地转染体外培养的IPE细胞并有效表达PEDF。 |