目的 硫柳汞（Thimerosal）是一种在眼科制剂中广泛应用的防腐剂。本研究旨在研究硫柳汞对体外培养的人角膜上皮细胞（human corneal epithelial cells，HCEs)存活率、DNA损伤、活性氧（reactive oxygen species，ROS）及细胞凋亡的影响，以及硫柳汞所致的人角膜上皮细胞DNA损伤的自身修复效应。
方法  采用浓度分别为0.00001%、0.00005%、0.0001%、0.0005%及0.001%的硫柳汞，用MTT法检测细胞存活率，作用时间分别为30min，60min，4h，8h，24h。用免疫荧光法检测细胞核内磷酸化的H2AX（gH2AX）焦点，以评估以DNA双链断裂（DNA double-strand breaks，DSBs）为主的DNA损伤情况；碱性彗星实验用于检测以DNA单链断裂（DNA single-strand breaks，SSBs）为主的DNA损伤；以乙酰乙酸双氯荧光素（DCFH-DA）为探针，应用流式细胞仪检测细胞内ROS水平；用Annexin V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡；作用时间均为30min。不同浓度硫柳汞作用30min后，洗去，加入新鲜培养基培养24h，碱性彗星实验观察细胞的DNA损伤修复情况，用Annexin V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡。
结果 MTT结果表明，硫柳汞对角膜上皮细胞存活率的影响呈现明显的时间-剂量效应。免疫荧光实验结果显示硫柳汞处理30min后，不同浓度处理组HCEs细胞核内含有H2AX焦点的细胞比例及焦点数均较对照组显著增加（P<0.05），且呈现明显剂量效应。碱性彗星实验结果显示0.0001%，0.0005%，0.001%三组可导致显著的HCEs细胞核SSBs（P<0.001）。流式细胞仪检测结果显示，不同浓度硫柳汞处理后的HCEs细胞内ROS水平均较对照组增高，差异有显著性（P＜0.001）；Annexin V-FITC/PI试剂盒检测各组均未见明显细胞凋亡。修复24h后，碱性彗星实验结果显示各组均无明显的彗星尾巴出现，使用流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示0.0001%，0.0005%，0.001%三组出现明显的细胞凋亡，且以晚期凋亡为主。
结论 硫柳汞可导致HCEs细胞核DNA损伤并影响其细胞活性。硫柳汞可导致HCEs细胞内ROS增加，这可能是其引起DNA损伤的机制。高浓度硫柳汞引起的DNA损伤是不可修复的，可能直接介导了细胞的凋亡。