目的  利用腺相关病毒（AAV）载体介导人β-神经生长因子（β-NGF）基因转染猫角膜内皮细胞，探讨其对该细胞生物学效应的影响。

方法  体外培养猫角膜内皮细胞，通过细胞形态学观察、神经特异烯醇化酶（NSE）单克隆抗体免疫组织化学染色鉴定细胞的种类及纯度。腺相关病毒载体介导绿荧光蛋白基因转染猫角膜内皮细胞，根据绿色荧光蛋白的阳性表达率测定重组腺相关病毒对猫角膜内皮细胞的感染效率。利用构建的AAV-β-NGF病毒颗粒将人β-NGF基因转染至猫角膜内皮细胞，Real-Time PCR及ELISA分别在mRNA和蛋白水平检测转染后12h、1d、3d、5d、7d时β-NGF的表达变化。转基因后3d通过猫角膜内皮细胞MTT值检测细胞增殖能力的变化，流式细胞仪测定处于G1期的细胞比例，检测外源基因对细胞周期的影响。

结果  猫角膜内皮细胞体外培养可形成完整纯净的细胞单层，经形态学观察、NSE的免疫组织化学染色证明为纯净的猫角膜内皮细胞。腺相关病毒介导的绿色荧光蛋白基因转染猫角膜内皮细胞24h后，在荧光显微镜下可见到细胞内清晰的绿色荧光，镜下随机计数10 个视野中荧光细胞的百分率，测得转染效率可达67.5%。AAV-β-NGF病毒颗粒转染内皮细胞后，Real-Time PCR及ELISA结果显示，转染后各时间点猫角膜内皮细胞中β-NGF mRNA和蛋白的表达随时间延长不断增高，5天时表达量最高，随后略有下降，与对照组相比差异均有统计学意义（P<0.05）；MTT值及流式细胞仪测定的G1期细胞比例结果显示，转染后猫角膜内皮细胞增殖能力较对照组明显增强，细胞周期中G1期细胞比例明显增加，与对照组相比差异均有统计学意义（P<0.05）。

结论  腺相关病毒可有效介导人β-NGF基因转染体外培养的猫角膜内皮细胞，并在猫角膜内皮细胞中持续稳定表达，促进该细胞的分裂再生。