目的 (1)制备密蒙花总黄酮含药血浆。(2)培养原代泪腺上皮细胞并建立含药血浆干预泪腺上皮细胞的细胞模型。(3)观察含药血浆对泪腺上皮细胞Bax mRNA及Bcl-2 mRNA表达的影响。
方法 (1)选用健康1月Wistar雄性大鼠20只,体重200g左右,随机分为A、B两组,每组10只。A代表:含药血浆组,B代表:空白血浆组,分别用密蒙花混悬液及生理盐水进行灌胃,2次/d,灌胃7d后,断头取血,以获取含药血浆及空白血浆。(2)培养泪腺上皮细胞及建立含药血浆干预泪腺上皮细胞的细胞模型。待细胞融合2d后,将所培养细胞随机分为无雄激素培养黄酮治疗组(简称密蒙花总黄酮组),含雄激素培养对照组(简称雄激素组),无雄激素培养空白组(简称空白组)。分别加入含密蒙花总黄酮血浆、丙酸睾酮、含空白血浆开始进行干预。干预48h后,再分别加入终浓度为100µmol/l H2O2继续培养60分钟,诱导细胞凋亡。3. TRIzol试剂提取细胞总RNA。RT-PCR法检测凋亡相关基因蛋白Bax mRNA及bcl-2 mRNA在泪腺中的表达。
结果 (1)成功获取含药血浆,并将其作用于体外培养的泪腺上皮细胞。(2)成功培养泪腺上皮细胞。(3)密蒙花组、雄激素组能够抑制泪腺中Bax mRNA的表达,与空白组比较差异有统计学意义(P<0.01),密蒙花组Bax mRNA的表达低于雄激素组,比较差异有统计学意义(P<0.01),密蒙花组、雄激素组Bcl-2 mRNA的表达均高于空白组,比较差异有统计学意义(P<0.01),密蒙花组Bcl-2 mRNA的表达高于雄激素组,比较差异有统计学意义(P<0.01)。
结论 (1)密蒙花总黄酮含药血浆能抑制泪腺上皮细胞的凋亡。(2)密蒙花总黄酮含药血浆作用于雄激素水平下降所致干眼症的细胞模型可抑制Bax mRNA的表达,使Bax mRNA的表达量降低,同时促进Bcl-2 mRNA的表达,使Bcl-2 mRNA的表达量增加。(3)密蒙花总黄酮含药血浆很可能正是通过抑制泪腺上皮细胞Bax mRNA及促进Bcl-2 mRNA的表达的途径而达到抑制细胞凋亡的作用。 |