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定量分析在晶状体蛋白质组学研究中的作用
作者:刘平  文章来源:哈尔滨医科大学附属第一医院眼科医院  点击数225  更新时间:2011/9/13  文章录入:毛进  责任编辑:毛进

目的 在白内障和正常晶状体差异蛋白质组学研究中应用精确的定量分析,提高蛋白质组学数据的利用率。
方法 从白内障和正常晶状体中提取的总蛋白,经双向荧光差异凝胶电泳(2-D DIGE)分离后,应用DeCyder 6.5 软件将每个蛋白质的丰度标准化,进而准确比较各蛋白在两组间的差异;SDS-凝胶电泳(SDS-PAGE)图像中白内障组(分II,III,IV级;Pirie分级)和正常对照组之间的差异条带,应用ImageQuant TL软件定量分析;差异条带经液相色谱质谱联用(LC-MS/MS)分析后,获得的质谱数据用Mascot法搜库,得到差异条带的蛋白质组成,并利用每个蛋白的eMPAI数据估算其在该条带总蛋白中的相对含量。
结果 利用标准化的蛋白质丰度,计算出了每个蛋白在白内障组和正常对照组中含量的比例,其中39个蛋白质点的丰度差异超过1.5倍;ImageQuant TL软件定量分析显示,在正常对照、II级、III级和IV级白内障各组中,与白内障形成相关的高分子量聚集体(>200 kDa)分别占各自总蛋白的1.6%、7.1%、10.4%和15.7%,有显著差异(P<0.05),而低分子量蛋白的变化正好相反;eMPAI数据的利用,估算了在白内障晶状体中每种晶体蛋白的聚集率,每种晶体蛋白的聚集倾向差异较大,其中αA-晶体蛋白最容易聚集,而βA3-、βA4-和γC-晶体蛋白不易发生聚集。
结论 多种定量分析的应用显著提高了差异蛋白质组学数据的利用率;由于人类晶状体蛋白缺乏更新、存在时间过长导致的蛋白质组学研究的复杂性和特殊性,这些定量分析的应用就显得尤为重要。

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