目的:通过光镜、电镜酶组织细胞化学方法测定兔角膜内皮细胞酶活性,从而判定真空冷冻干燥保存法(冻干法)对于兔角膜内皮细胞活性的影响。
方法:按随机及配对原则将兔眼分为3组,新鲜对照组、冷冻对照组、冻干实验组。冷冻组为对离体兔角膜片进行深低温冷冻保存。冻干组为对离体兔角膜片行真空冷冻干燥保存,将离体的角膜组织经过深低温冷冻使组织内的水分凝结成固态,然后在真空条件下使固态的水升华,冻干的角膜片可冰箱及室温下保存。将冷冻及冻干保存的兔角膜片分别复水及复温后,与新鲜的角膜片同时进行三磷酸腺苷酶(ATPase)、琥珀酸脱氢酶(SDH)的光镜及电镜酶组织细胞化学染色,观察三组酶的活性是否有差异。
结果:在新鲜对照组、冷冻对照组、冻干实验组中,ATPase 及SDH的酶组织细胞化学染色在光镜观察下均呈阳性反应。冻干组与新鲜组和冷冻组相比,内皮细胞ATPase和SDH酶的内皮细胞酶的活性较低,平均积分光密度值(IOD)差异具有统计学意义(P<0.01)。电镜酶组织细胞化学染色三组样本角膜内皮细胞膜上均有ATPase电子致密颗粒呈线性沉着。SDH电镜未能观察到结果。
结论:冻干保存法可使离体角膜内皮细胞保持一定的活性。与新鲜及冷冻保存的兔角膜相比,活性较低。但可以推测冻干法有可能成为一种新的角膜长期保存方法。
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