目的 探讨miRNA204/211对人类视网膜色素上皮细胞生理功能的调控作用并初步探讨相应的作用机制。
方法 MicroRNA Assays观察miRNA204/211在视网膜色素上皮细胞的表达水平,Northern blot结合实时定量PCR验证miRNA204/211在视网膜色素上皮细胞的表达。视网膜色素上皮细胞经Anti-miR-204/211处理后:电镜观察视网膜色素上皮细胞超微结构的改变;电阻仪评估跨上皮电阻的变化;创伤-愈合实验观察miRNA204/211对上皮细胞迁移功能的影响;WB结合实时定量PCR验证经Anti-miR-204/211处理后视网膜色素上皮细胞中的哪些基因和蛋白会发生相应的改变。
结果 miRNA204/211是视网膜色素上皮细胞的中表达峰度最高的miRNA,Anti-miR-204/211处理后:超微电镜结果显示视网膜色素上皮细胞出现顶膜出现回缩,顶部微绒毛减少,连接复合物不完整,紧密连接与粘附连接结构减少;视网膜色素上皮细胞跨上皮电阻下降约80%,上皮细胞的迁移能力显著提高;紧密连接蛋白claudins 10, 16, 19表达显著降低。
结论 miRNA204/211是维持视网膜色素上皮细胞屏障功能和细胞生理的新因子,miRNA204/211对细胞间连接结构和功能的调节作用是其参与维持视网膜色素上皮细胞生理的途径之一。 |